ຫຼັກການ ແລະວິທີການວິເຄາະປະລິມານໂດຍ Liquid Chromatography

ກົນໄກການແຍກຕົວຂອງທາດໂຄມໄຟຂອງແຫຼວແມ່ນອີງໃສ່ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຄວາມໃກ້ຊິດຂອງອົງປະກອບໃນການປະສົມສໍາລັບສອງໄລຍະ.

ອີງ​ຕາມ​ໄລ​ຍະ​ສະ​ຖາ​ນີ​ທີ່​ແຕກ​ຕ່າງ​ກັນ​, chromatography ຂອງ​ແຫຼວ​ແບ່ງ​ອອກ​ເປັນ chromatography ຂອງ​ແຫຼວ - ແຂງ​, chromatography ຂອງ​ແຫຼວ - ຂອງ​ແຫຼວ​ແລະ chromatography ໄລ​ຍະ​ຜູກ​ມັດ​.ການນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສຸດແມ່ນ chromatography ແຫຼວ - ແຂງທີ່ມີ silica gel ເປັນ filler ແລະ chromatography ໄລຍະຜູກມັດທີ່ມີ microsilica ເປັນ matrix.

ອີງຕາມຮູບແບບຂອງໄລຍະ stationary, chromatography ແຫຼວສາມາດແບ່ງອອກເປັນ chromatography ຖັນ, chromatography ເຈ້ຍແລະ chromatography ຊັ້ນບາງໆ.ອີງຕາມຄວາມສາມາດຂອງ adsorption, ມັນສາມາດແບ່ງອອກເປັນ adsorption chromatography, partition chromatography, ion exchange chromatography ແລະ gel permeation chromatography.

ໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້, ລະບົບການໄຫຼຂອງຂອງແຫຼວທີ່ມີຄວາມກົດດັນສູງໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນລະບົບ chromatography ຖັນຂອງແຫຼວເພື່ອເຮັດໃຫ້ໄລຍະມືຖືໄຫຼຢ່າງໄວວາພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນສູງເພື່ອປັບປຸງຜົນກະທົບຂອງການແຍກ, ດັ່ງນັ້ນ, ປະສິດທິພາບສູງ (ຊຶ່ງເອີ້ນກັນວ່າຄວາມດັນສູງ) chromatography ຂອງແຫຼວ. ໄດ້​ເກີດ​ຂຶ້ນ​.

ສ່ວນ
01 ຫຼັກການການວິເຄາະປະລິມານຂອງ Liquid Chromatography

​ເພື່ອ​ກຳນົດ​ປະລິມານ​ບົນ​ພື້ນຖານ​ດ້ານ​ຄຸນ​ນະພາ​ບ, ທາດ​ບໍລິສຸດ​ແມ່ນ​ຕ້ອງການ​ຕາມ​ມາດຕະຖານ;

ປະລິມານ chromatography ຂອງແຫຼວແມ່ນວິທີການປະລິມານທີ່ຂ້ອນຂ້າງ: ນັ້ນແມ່ນ, ປະລິມານຂອງການວິເຄາະໃນສ່ວນປະສົມແມ່ນຄາດຄະເນຈາກປະລິມານທີ່ຮູ້ຈັກຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານບໍລິສຸດ.

ສ່ວນ
02 ພື້ນຖານສໍາລັບປະລິມານໂດຍ Liquid Chromatography

ປະລິມານຂອງອົງປະກອບວັດແທກ (W) ແມ່ນອັດຕາສ່ວນກັບຄ່າຕອບສະຫນອງ (A) (ຄວາມສູງສູງສຸດຫຼືພື້ນທີ່ສູງສຸດ), W = f × A.

ປັດໄຈການແກ້ໄຂປະລິມານ (f): ມັນແມ່ນອັດຕາສ່ວນຄົງທີ່ຂອງສູດການຄິດໄລ່ປະລິມານ, ແລະຄວາມ ໝາຍ ທາງກາຍະພາບຂອງມັນແມ່ນປະລິມານຂອງສ່ວນປະກອບວັດແທກທີ່ສະແດງໂດຍຄ່າຕອບສະ ໜອງ ຂອງຫົວໜ່ວຍ (ພື້ນທີ່ສູງສຸດ).

ປັດໄຈການແກ້ໄຂປະລິມານສາມາດໄດ້ຮັບຈາກຈໍານວນທີ່ຮູ້ຈັກຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານແລະມູນຄ່າການຕອບສະຫນອງຂອງມັນ.

ການວັດແທກມູນຄ່າການຕອບສະຫນອງຂອງອົງປະກອບທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ, ແລະປະລິມານຂອງອົງປະກອບສາມາດໄດ້ຮັບໂດຍປັດໄຈການແກ້ໄຂປະລິມານ.

ສ່ວນ
03 ຄໍາສັບທົ່ວໄປໃນການວິເຄາະປະລິມານ

ຕົວຢ່າງ (ຕົວຢ່າງ): ການແກ້ໄຂທີ່ມີການວິເຄາະສໍາລັບການວິເຄາະ chromatographic.ແບ່ງອອກເປັນຕົວຢ່າງມາດຕະຖານແລະບໍ່ຮູ້ຈັກ.

ມາດຕະຖານ: ຜະລິດຕະພັນບໍລິສຸດທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ຮູ້ຈັກ.ຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ (ບໍ່ຮູ້): ປະສົມທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງສານທີ່ຈະທົດສອບ.

ນ້ໍາຫນັກຕົວຢ່າງ: ການຊັ່ງນໍ້າຫນັກຕົ້ນສະບັບຂອງຕົວຢ່າງທີ່ຈະທົດສອບ.

ການເຈືອຈາງ: ປັດໄຈການເຈືອຈາງຂອງຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ.

ອົງປະກອບ : ຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ທີ່ຈະວິເຄາະປະລິມານ, ນັ້ນແມ່ນ, ການວິເຄາະທີ່ເນື້ອຫາບໍ່ຮູ້ຈັກ.

ປະລິມານຂອງອົງປະກອບ (ຈໍານວນ): ເນື້ອໃນ (ຫຼືຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ) ຂອງສານທີ່ຈະທົດສອບ.

Integerity : ຂະບວນການຄິດໄລ່ຂອງການວັດແທກພື້ນທີ່ສູງສຸດຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ໂດຍຄອມພິວເຕີ.

Calibration curve: ເປັນເສັ້ນໂຄ້ງຂອງເນື້ອໃນອົງປະກອບທຽບກັບຄ່າຕອບໂຕ້, ສ້າງຂຶ້ນຈາກປະລິມານທີ່ຮູ້ຈັກຂອງສານມາດຕະຖານ, ໃຊ້ເພື່ອກໍານົດເນື້ອໃນທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກຂອງການວິເຄາະ.

ສ່ວນ
04 ການວິເຄາະປະລິມານຂອງ Liquid Chromatography

1. ເລືອກວິທີການ chromatographic ທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການວິເຄາະປະລິມານ:

l ຢືນຢັນຈຸດສູງສຸດຂອງອົງປະກອບທີ່ກວດພົບແລະບັນລຸຄວາມລະອຽດ (R) ສູງກວ່າ 1.5

l ກໍານົດຄວາມສອດຄ່ອງ (ຄວາມບໍລິສຸດ) ຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ຂອງອົງປະກອບທີ່ທົດສອບ

l ກໍານົດຂອບເຂດຈໍາກັດການກວດພົບແລະປະລິມານຂອງວິທີການ;ຄວາມອ່ອນໄຫວ ແລະໄລຍະເສັ້ນຊື່

2. ສ້າງເສັ້ນໂຄ້ງ calibration ກັບຕົວຢ່າງມາດຕະຖານຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ

3. ກວດສອບຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມແມ່ນຍໍາຂອງວິທີການປະລິມານ

4. ໃຊ້ຊອບແວການຈັດການ chromatography ທີ່ສອດຄ້ອງກັນເພື່ອປະຕິບັດການເກັບຕົວຢ່າງ, ການປະມວນຜົນຂໍ້ມູນແລະລາຍງານຜົນໄດ້ຮັບ

ສ່ວນ
05 ການກໍານົດຈຸດສູງສຸດຂອງປະລິມານ (ຄຸນນະພາບ)

ກໍານົດຄຸນນະພາບຂອງແຕ່ລະຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ເພື່ອເປັນປະລິມານ

ທໍາອິດ, ໃຊ້ຕົວຢ່າງມາດຕະຖານເພື່ອກໍານົດເວລາເກັບຮັກສາ (Rt) ຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ທີ່ຈະເປັນປະລິມານ.ໂດຍການປຽບທຽບເວລາເກັບຮັກສາ, ຊອກຫາອົງປະກອບທີ່ສອດຄ່ອງກັບແຕ່ລະຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic ໃນຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ.ວິ​ທີ​ການ​ຄຸນ​ນະ​ພາບ chromatographic ແມ່ນ​ການ​ປຽບ​ທຽບ​ທີ່​ໃຊ້​ເວ​ລາ​ການ​ເກັບ​ຮັກ​ສາ​ໄວ້​ກັບ​ຕົວ​ຢ່າງ​ມາດ​ຕະ​ຖານ​.ເງື່ອນໄຂບໍ່ພຽງພໍການຢືນຢັນເພີ່ມເຕີມ (ຄຸນນະພາບ)

1. ວິທີການເພີ່ມມາດຕະຖານ

2. ໃຊ້ວິທີການອື່ນໆໃນເວລາດຽວກັນ: ວິທີການ chromatographic ອື່ນໆ (ປ່ຽນກົນໄກເຊັ່ນ: ການນໍາໃຊ້ຖັນ chromatographic ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ເຄື່ອງກວດຈັບອື່ນໆ (PDA: ການປຽບທຽບ spectrum, spectrum library search; MS: mass spectrum analysis, spectrum library search)

3. ເຄື່ອງມື ແລະ ວິທີການອື່ນໆ

ສ່ວນ
06 ການຢືນຢັນຄວາມສອດຄ່ອງຂອງປະລິມານສູງສຸດ

ຢືນຢັນຄວາມສອດຄ່ອງສູງສຸດຂອງ chromatographic (ຄວາມບໍລິສຸດ)

ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າມີອົງປະກອບວັດແທກພຽງແຕ່ຫນຶ່ງພາຍໃຕ້ແຕ່ລະຈຸດສູງສຸດຂອງ chromatographic

ກວດເບິ່ງການແຊກແຊງຈາກສານທີ່ຮ່ວມ eluting ( impurities )

ວິທີການຢືນຢັນຄວາມສອດຄ່ອງຂອງ Chromatographic Peak (ຄວາມບໍລິສຸດ)

ການປຽບທຽບ Spectrograms ກັບ Photodiode Matrix (PDA) Detectors

ການລະບຸຄວາມບໍລິສຸດສູງສຸດ

2996 ທິດສະດີມຸມບໍລິສຸດ

ວິທີການປະລິມານທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປໃນ PART 07

ວິທີການເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ, ແບ່ງອອກເປັນວິທີການມາດຕະຖານພາຍນອກແລະວິທີການມາດຕະຖານພາຍໃນ:

1. ວິທີການມາດຕະຖານພາຍນອກ: ໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດໃນໂຄມໄຟຂອງແຫຼວ

ຊຸດຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ຮູ້ຈັກໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍໃຊ້ຕົວຢ່າງບໍລິສຸດຂອງທາດປະສົມທີ່ຈະທົດສອບເປັນຕົວຢ່າງມາດຕະຖານ.ສັກເຂົ້າໄປໃນຖັນເຖິງມູນຄ່າການຕອບສະຫນອງຂອງມັນ (ພື້ນທີ່ສູງສຸດ).
ພາຍໃນຂອບເຂດທີ່ແນ່ນອນ, ມີຄວາມສໍາພັນເສັ້ນຊື່ທີ່ດີລະຫວ່າງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານແລະຄ່າຕອບສະຫນອງ, ຄື W = f × A , ແລະເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານຖືກສ້າງຂື້ນ.

ພາຍ​ໃຕ້​ເງື່ອນ​ໄຂ​ການ​ທົດ​ລອງ​ດຽວ​ກັນ​ທີ່​ແນ່​ນອນ​, ສັກ​ຕົວ​ຢ່າງ​ທີ່​ບໍ່​ຮູ້​ຈັກ​ເພື່ອ​ໃຫ້​ໄດ້​ຮັບ​ຄ່າ​ຕອບ​ສະ​ຫນອງ​ຂອງ​ອົງ​ປະ​ກອບ​ທີ່​ຈະ​ວັດ​ແທກ​ໄດ້​.ອີງຕາມຄ່າສໍາປະສິດທີ່ຮູ້ຈັກ f, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງອົງປະກອບທີ່ຈະວັດແທກສາມາດໄດ້ຮັບ.

ຂໍ້ດີຂອງວິທີການມາດຕະຖານພາຍນອກ:ການ​ດໍາ​ເນີນ​ງານ​ງ່າຍ​ດາຍ​ແລະ​ການ​ຄິດ​ໄລ່​, ມັນ​ເປັນ​ວິ​ທີ​ການ​ປະ​ລິ​ມານ​ທີ່​ໃຊ້​ທົ່ວ​ໄປ​;ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງສໍາລັບແຕ່ລະອົງປະກອບທີ່ຈະກວດພົບແລະ eluted;ຕົວຢ່າງມາດຕະຖານແມ່ນຕ້ອງການ;ເງື່ອນໄຂການວັດແທກຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກຄວນສອດຄ່ອງ;ປະລິມານການສີດຄວນຈະມີຄວາມຊັດເຈນ.

ຂໍ້ເສຍຂອງວິທີການມາດຕະຖານພາຍນອກ:ເງື່ອນໄຂໃນການທົດລອງແມ່ນຕ້ອງການສູງ, ເຊັ່ນ: ຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງເຄື່ອງກວດຈັບ, ອັດຕາການໄຫຼ, ແລະອົງປະກອບຂອງໄລຍະມືຖືບໍ່ສາມາດປ່ຽນແປງໄດ້;ປະລິມານການສີດແຕ່ລະຄັ້ງຄວນມີການເຮັດເລື້ມຄືນທີ່ດີ.

2. ວິທີການມາດຕະຖານພາຍໃນ: ຖືກຕ້ອງ, ແຕ່ມີບັນຫາ, ໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດໃນວິທີການມາດຕະຖານ

ຈໍານວນມາດຕະຖານພາຍໃນທີ່ຮູ້ຈັກຈະຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນມາດຕະຖານເພື່ອເຮັດໃຫ້ມາດຕະຖານປະສົມ, ແລະຊຸດມາດຕະຖານການເຮັດວຽກຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ຮູ້ຈັກໄດ້ຖືກກະກຽມ.ອັດຕາສ່ວນ molar ຂອງມາດຕະຖານກັບມາດຕະຖານພາຍໃນໃນມາດຕະຖານປະສົມຍັງຄົງບໍ່ປ່ຽນແປງ.ສັກເຂົ້າໄປໃນຖັນ chromatographic ແລະເອົາ (ພື້ນທີ່ສູງສຸດຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານ / ພື້ນທີ່ສູງສຸດຂອງຕົວຢ່າງມາດຕະຖານພາຍໃນ) ເປັນຄ່າຕອບສະຫນອງ.ອີງຕາມຄວາມສໍາພັນເສັ້ນຊື່ລະຫວ່າງຄ່າຕອບສະຫນອງແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງມາດຕະຖານການເຮັດວຽກ, ຄື W = f × A, ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານແມ່ນເຮັດ.

ຈໍານວນມາດຕະຖານພາຍໃນທີ່ຮູ້ຈັກຈະຖືກເພີ່ມໃສ່ຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກແລະສີດເຂົ້າໄປໃນຖັນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄ່າຕອບສະຫນອງຂອງອົງປະກອບທີ່ຈະວັດແທກ.ອີງຕາມຄ່າສໍາປະສິດທີ່ຮູ້ຈັກ f, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງອົງປະກອບທີ່ຈະວັດແທກສາມາດໄດ້ຮັບ.

ຄຸນລັກສະນະຂອງວິທີການມາດຕະຖານພາຍໃນ:ໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ, ຕົວຢ່າງແລະມາດຕະຖານພາຍໃນໄດ້ຖືກປະສົມເຂົ້າກັນແລະສີດເຂົ້າໄປໃນຖັນ chromatographic, ດັ່ງນັ້ນຕາບໃດທີ່ອັດຕາສ່ວນຂອງປະລິມານຂອງອົງປະກອບທີ່ວັດແທກກັບມາດຕະຖານພາຍໃນໃນການແກ້ໄຂປະສົມແມ່ນຄົງທີ່, ການປ່ຽນແປງຂອງປະລິມານຕົວຢ່າງ. ຈະບໍ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນໄດ້ຮັບໃນປະລິມານ..ວິທີການມາດຕະຖານພາຍໃນຊົດເຊີຍອິດທິພົນຂອງປະລິມານຕົວຢ່າງ , ແລະແມ້ກະທັ້ງໄລຍະມືຖືແລະເຄື່ອງກວດຈັບ, ສະນັ້ນມັນຖືກຕ້ອງຫຼາຍກ່ວາວິທີການມາດຕະຖານພາຍນອກ.

ສ່ວນ
08 ປັດໃຈທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນການວິເຄາະດ້ານປະລິມານ

ຄວາມຖືກຕ້ອງທີ່ບໍ່ດີສາມາດເກີດຈາກ:

ການປະສົມປະສານຂອງພື້ນທີ່ສູງສຸດທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ການທໍາລາຍຕົວຢ່າງຫຼື impurities ນໍາສະເຫນີໃນລະຫວ່າງການກະກຽມຕົວຢ່າງ, vial ຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຜະນຶກເຂົ້າກັນ, ຕົວຢ່າງຫຼືການລະເຫີຍຂອງ solvent, ການກະກຽມຕົວຢ່າງບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ບັນຫາການສັກຢາຕົວຢ່າງ, ການກະກຽມມາດຕະຖານພາຍໃນບໍ່ຖືກຕ້ອງ

ເຫດຜົນທີ່ເປັນໄປໄດ້ສໍາລັບຄວາມຊັດເຈນທີ່ບໍ່ດີ:

ການເຊື່ອມໂຍງສູງສຸດທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ບັນຫາການສີດຫຼື injector, ການທໍາລາຍຕົວຢ່າງຫຼື impurities ນໍາສະເຫນີໃນລະຫວ່າງການກະກຽມຕົວຢ່າງ, ບັນຫາ chromatographic, ການຕອບສະຫນອງເຄື່ອງກວດ degraded.